各位小伙伴都听说过死体积吧。死体积越大，导致样品扩散的空间很大，色谱峰会更容易展宽，峰形变差。那么死体积该如何定义呢，死体积大小如何计算，这里小编就给各位小伙伴做个介绍。死体积的定义死体积狭义上指的是色谱柱中未被固定相占据的空隙体积，即色谱柱内流动相的体积。广义上的死体积是指进样位置（进样口）到检测位置（检测器流通池）这一段的体积（PS:除去色谱柱中填料体积），一旦色谱柱连接，这段体积（图示橙色管路）是不变的（死的）。
HPLC中色谱柱死体积该如何计算
对于HPLC来说，该如何计算死体积呢。死体积(dead volume,V0)——由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程，其它3部分只起峰扩展作用。为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。死时间(dead time,t0)——不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。测量系统死体积通常需要通过实验进行测量，常用方法是通过进一针和色谱柱固定相没有任何作用的特殊溶液（方法中会有规定，例如：尿嘧啶，少量NaNO3或甲醇溶于流动相得到的溶液，也有直接用100％色谱纯甲醇进样的情形）时，就会得到一个色谱峰，由此峰可以测得死时间（t0），这就是t0的实测结果。然后通过计算得到系统死体积:死体积（V0) = 死时间t0×流动相的流速F。
减小死体积的注意事项
在我们使用或维护的过程中，如果涉及管路等配件的更换，应该选择与原规格一致的配件，以确保死体积与原来一致，避免死体积的增加而带来峰形的展宽。接装色谱柱时，需确保管线接头匹配完好（特别注意peek管接头的使用，以及管线与色谱柱的连接处）避免形成接头空腔（如下图）。