柱的稳定性与固定相类型及使用情况有关。如流动相中盐类的存在会使键合相柱的性能衰退;以SiO2为基质的固定相,过程随温度和pH(>8)增加而加速。一根柱子使用是否得当,直接影响它的柱效和寿命。对于填装了粒度为10μm以下的固定相的柱子,尤其如此。为了保持柱效、柱容量及渗透性,必须进行仔细地保养。是否会由于柱外效应,使分析柱的柱效明显下降?
1.柱易被极细的颗粒堵塞,因此必须将流动相仔细地过滤。在流动相贮槽与柱之间,使用0.5μm孔径的过滤器。水往往是一个重要的污染源。在水溶液流动相(如缓冲液)中,细菌容易生长,可能堵塞筛板。防止细菌生长的办法是加入抑制剂,如0.01%NaNO3。显然,抑制剂不能干扰分离和测定。
2.在恒定压力下,发现流量减少,柱子可能部分堵塞。堵塞最容易发生在极窄的入口接头处以及入口、出口筛板处。堵塞后需要仔细拆洗,清除堵塞物,但必须防止较强的机械震动,防止用热手接触柱子,以扰动柱内的固定相层,使柱效发生变化。
3.柱子的实际操作压力应低于填装时的最高压力,最好在最高压力的一半以下。实际操作压力过高,易使入口的固定相层下沉,形成一个空穴。若空穴形成,应重新装柱。在空穴中加入新的匀浆或玻璃微珠,也无法恢复到原来的柱效。
4.应该用进样阀,而不用注射器进样,以防止注射隔膜碎屑集聚在柱入口。
5.要防止反冲(流动相逆向流动),否则使固定相层位移,柱效下降。
6.柱子两端用金属螺帽封闭,保存在纯净的有机溶剂中。应该将柱子保存在以下pH范围内的水溶液流动相中:2<pH<8.5。为了长期保存,最好用纯有机溶剂(如甲醇)清洗柱子。
7.一定要防止柱子干涸,特别是硬胶柱。
8.使用卫柱(Guard Column,亦称预柱)。连续注射含有强滞留(不被洗脱)组分的样品,将使柱效下降,保留值改变,选择性变坏,柱寿命缩短。为了延长柱寿命,在进样阀和分析柱之间加上卫柱。
卫柱较短(5~10cm),固定相与分析柱类似。其作用是吸着强滞留的组分,防止对分析柱的污染,保持分析柱性能稳定。实验表明,只要卫柱与高效、小粒度分析柱联用,除了使k’为零的组分的塔板数大大减少外,对k’值较大的组分,其柱效下降很少。
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