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高效毛细管电泳HPCE的分析原理

高效毛细管电泳( high performance capillary electrophoresis ,HPCE)


MECC 的基本原理
       MECC 是在CZE 基础上使用表面活性剂来充当胶束相,以胶束增溶作为分配原理,溶质在水相、胶束相中的分配系数不同,在电场作用下, 毛细管中溶液的电渗流和胶束的电泳,使胶束和水相有不同的迁移速度, 同时待分离物质在水相和胶束相中被多次分配, 在电渗流和这种分配过程的双重作用下得以分离。MECC 是电泳技术与色谱法的结合,适合同时分离分析中性和带电的样品分子。

CZE 的基本原理

     
        HPLC 选用的毛细管一般内径约为50μm(20~200 μm),外径为375 μm,有效长度为50cm(7~100cm)。毛细管两端分别浸入两分开的缓冲液中,同时两缓冲液中分别插入连有高压电源的电极, 该电压使得分析样品沿毛细管迁移, 当分离样品通过检测器时, 可对样品进行分析处理。HPLC 进样一般采用电动力学进样(低电压)或流体力学进样(压力或抽吸)两种方式。在毛细管电泳系统中,带电溶质在电场作用下发生定向迁移,其表观迁移速度是溶质迁移速度与溶液电渗流速度的矢量和。所谓电渗是指在高电压作用下, 双电层中的水合阴离子引起流体整体地朝负极方向移动的现象; 电泳是指在电解质溶液中, 带电粒子在电场作用下, 以不同的速度向其所带电荷相反方向迁移的现象。溶质的迁移速度由其所带电荷数和分子量大小决定,另外还受缓冲液的组成、性质、pH 值等多种因素影响。带正电荷的组份沿毛细管壁形成有机双层向负极移动, 带负电荷的组分被分配至毛细管近中区域, 在电场作用下向正极移动。与此同时, 缓冲液的电渗流向负极移动, 其作用超过电泳,最终导致带正电荷、中性电荷、负电荷的组份依次通过检测器。

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